武漢紐斯特生物技術有限公司歡迎您!

手機店鋪

neweastbio@126.com

logo

 | 027-87561033

中文EN

定制服務

CUSTOM SERVICE

免疫細胞化學實驗操作指南

該免疫細胞化學實驗方法僅供參考,由于每個實驗使用的試劑不同,并且涉及不同的物種,組織類型及實驗應用,實驗人員設計應根據具體情況設計實驗步驟和改良。

所需試劑
  • PBS 洗滌液. 磷酸鹽緩沖液 (PBS). 使用 10x PBS, pH 7.2 (0.2M 磷酸鉀, 1.5M NaCl). 用適量去離子水稀釋到1x.

  • 甲醛固定. 用PBS稀釋到 4%.

  • 抗體稀釋液. 制備100ml 的PBS 洗滌液,加入1ml 與二抗宿主同物種的正常血清.

  • 生物素化的二抗. 在抗體稀釋液中制備生物素化的二抗溶液. 使用抗一抗宿主的生物素化的二抗.

  • 鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化酶. 在PBS緩沖液中制備鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化酶溶液.

  • DAB 底物.

  • 蘇木精復染色以及固定介質.

 

步驟
  1. 將細胞生長于顯微鏡載玻片,或蓋玻片,或細胞培養板上。除去培養基液,用冰冷的PBS小心清洗細胞3次。用含4%甲醛的PBS溶液于冰上固定細胞30分鐘,使用的甲醛溶液應與最初培養基液體積相等。棄去固定液,用PBS沖洗3次每次5分鐘。如需要,可在含1% H2O2 的PBS溶液中孵育5分鐘,以除去內源的過氧化物酶活性。用PBS清洗固定的細胞3次,每次5分鐘。

  2. 用抗體稀釋液制備適宜濃度的一抗溶液。移去細胞上的緩沖液。加入足夠量的一抗使其覆蓋細胞。室溫下孵育一抗60分鐘。如果一抗與抗原的親和力較低,可于4oC下過夜孵育。移去一抗溶液。用PBS清洗3次,每次5分鐘。

  3. 移去細胞上的緩沖液。加入稀釋的生物素化的二抗,室溫下孵育30分鐘。最佳的稀釋度每個批次二抗有所不同。用PBS清洗3次,每次5分鐘。

  4. 移去細胞上的緩沖液。加入稀釋的鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化酶,室溫下孵育30分鐘。移去溶液。 用PBS清洗3次,每次5分鐘。

  5. 移去緩沖液。加入DAB底物,孵育大概10分鐘或者直到反應顏色足夠深。

  6. 移去溶液。用蒸餾水清洗3次,每次2分鐘。用蘇木精復染色,根據濃度和所需顏色深度的不同,染色1至5分鐘。用蒸餾水清洗3次,每次2分鐘。用100%的乙醇給細胞脫水4次,每次2分鐘。用二甲苯清洗細胞4次每次2分鐘。加入2~3滴固定介質,固定好蓋玻片使之風干。

  7. 在顯微鏡下觀察細胞。陽性反應應是可見的棕色沉淀。細胞核應顯淺藍色。


Copyright?2019武漢紐斯特生物技術有限公司版權所有   備案號:鄂ICP備13003341號-2   公安備案號42018502003460

技術支持:優狐

9191精品国产免费久久 波多野结衣在线观看 日本动漫爆乳h动漫啪啪免费 国产一级婬片A片免费 国产成人精品a视频
少妇扒开给你看20分钟 日本XXXXX片免费播放 黄色在线播放 国产妓女在线视频播放 一级A级毛片 久久午夜福利无码电影 夜夜高潮夜夜爽高清视频吗 精品欧美成人高清在线观看 久久久一本精品久久精品六六 日本十八禁视频无遮挡 在线免费看黄片 女上男下吃奶啪啪作爱喷水 国产人成无码视频在线APP 思思久久精品在热线热 欧美日韩三级片 国产一级A片AV在线播放 日本一级婬片免费放天天 免费的日本一级婬片99 久久青青草原亚洲AV无码 亚洲AV色影在线 黑人巨大精品欧美一区二区 97理论三级在线看 亚洲日韩中文字幕无码一区 亚洲午夜国产精品无码中文字 国产a无码视频 56pao国产成视频永久 大鸡巴网站 18分钟处破痛哭AV 最新人C交ZOOZOOXX在线 亚洲精品色无码AV试看 97色伦图片97综合影院 久久久久高潮综合影院 亚洲,国产精品无码视 亚洲一级毛片无码无遮挡 亚洲人成电影在线观看网色 国产亚洲成AV人片在线观看 国自产拍在线天天更新A片 亚洲综合在线 无码潮喷中文字幕在线视频 早晨农村妇女偷拍视频 国产在线观看无码的免费网站 野狼AV午夜福利在线观看 国产A级理论片无码 精品亚洲AV无码综合网 男污女很猛烈的网站免费 翘臀美女XX00后进式GIF 日本精品αv中文字幕 午夜不卡无码中文字幕影院 国产精品碰碰现在自在拍 国产黄色片