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抗體常見問題之IHC


  問題             原因         解決方案
邊緣效應組織邊緣貼附不牢,邊緣組織松脫漂浮于液體中APES/多聚賴氨酸處理玻片;組織切片盡量??;盡量避免選用壞死較多的組織
試劑未充分覆蓋組織滴加試劑時讓試劑完全覆蓋組織
非特異性染色體抗體質量問題使用質量有保證的抗體
抗體孵育時間長減少孵育時間
抗體濃度過高降低抗體濃度
一抗為多抗使用單克隆抗體
內源性過氧化物酶及生物素延長滅活時間
封閉不足延長封閉時間
DAB孵育時間過久或濃度過高按說明書配置試劑,鏡下控制反應時間
抗體孵育后洗滌不充分每次孵育之后洗3*5次
滴加試劑時干片及時滴加試劑
切片在緩沖液中浸泡過久抗原修復之后及時封閉加一抗,不能過夜
陰性結果抗體濃度及質量選擇有質量保證的抗體,先做預實驗摸索抗體使用濃度
抗原修復不全摸索合適的抗原修復方式及修復時間
抗原豐度正常陰性
封閉時間過長減少封閉時間
DAB孵育時間短鏡下控制顯色時間
細胞通透不全,抗體未能進入細胞反應選擇合適的通透劑及其反應時間
一抗二抗不匹配選擇正確來源的二抗
脫片玻片未處理好玻片清洗干凈后用APES或多聚賴氨酸處理
切片厚薄不均勻更換刀片;調整好切片機狀態
烤片時間或溫度不夠60攝食度2小時
組織自身問題腫瘤壞死組織及骨組織本身易脫片
抗原修復時溫度迅速變化抗原修復后讓其自然冷卻
操作時用力過猛有脫片嫌疑的切片不要用力甩,用吸水紙吸干殘余液體
染色弱抗體濃度低,孵育時間短提高抗體濃度,延長反應時間
試劑使用超過有效期試劑定時更新
滴加試劑時殘余緩沖液過多使試劑稀釋滴加試劑前盡量減少殘余液體
封閉過度減少封閉時間
著色不均勻切片厚度不一致更換刀片;調整好切片機狀態
試劑配制未混勻使局部濃度不一致試劑充分混勻后滴加
試劑未完全覆蓋組織滴加試劑時讓試劑完全覆蓋組織
脫蠟不完全更換脫蠟劑或延長脫蠟時間


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